I laboratorieförsök studerades hur effektivt lustgas kan ombildas till kvävgas vid denitrifikation under olika betingelser. Särskilt vid höga ammoniumhalter i vattnet finns en risk att lustgas kan anrikas och avgå till luft. Brist på kolkälla, kvarvarande syre och bildning av salpetersyrlighet i en denitrifikationszon kan orsaka förhöjd lustgasbildning.
Det är önskvärt att åtgärder för att minska utsläpp av växthusgaser också sker vid avloppsreningsverk. Vid biologisk kväveavskiljning med hjälp av aktivt slam uppkommer normalt i relativt liten omfattning lustgas (N2O) som en oönskad biprodukt. Denna gas är en betydligt kraftfullare växthusgas än koldioxid (273 gånger starkare). Halterna i avgaser från normalbelastade biologiska reningssteg inrättade för kväveavskiljning ligger ofta på ca 1 %. Lustgas kan bildas på tre sätt: